Purificação de Intassomos do Vírus Espumoso Protótipo por Cromatografia de Exclusão Molecular

Inicie com uma suspensão contendo precipitados de intassomos do vírus foamy protótipo ou PFV, integrases monoméricas, oligômeros de DNA e agregados proteicos.

Os intassomos do PFV são tetraes de integrases virais complexados com oligômeros sintéticos que mimetizam o DNA genômico viral.

Adicione uma solução salina à suspensão e incube no gelo. O sal reduz a interação eletrostática entre os intassomos, permitindo que os precipitados se solubilizem.

Pipete suavemente em intervalos regulares para promover a solubilização do intassomo.

Centrifugue para formar o pellet do precipitado remanescente e colete o sobrenadante contendo os intassomos solúveis.

Utilize uma coluna de cromatografia de exclusão por tamanho previamente equilibrada, recheada com esferas de agarose reticulada, e aplique o sobrenadante na coluna.

Devido ao seu grande tamanho, agregados proteicos e intassomos contornam os poros das esferas e eluem mais cedo.

Integrases monoméricas menores e oligômeros entram nos poros das esferas e eluem mais tarde.

Colete as frações eluídas precocemente contendo intassomos para análises downstream adicionais.

Prepare duas ponteiras de pipeta de grande diâmetro removendo dois a quatro milímetros