Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:52 min. • August 31st, 2026
Inicie com um cultivo de células de câncer hepático humano transfectadas com RNA do vírus da hepatite E (HEV) para produção de partículas virais.
Alguns VHEs adquirem uma membrana endossomal de origem hospedeira e saem da célula, enquanto outros permanecem dentro da célula como VHEs não envelopados.
Para colher HEV extracelular, colete e filtre o sobrenadante do cultivo para remover detritos celulares.
Armazene em temperatura ultra-baixa para preservar a infectividade.
Para colher HEV intracelular, lave as células com um tampão.
Adicione tripsina-EDTA para destacar as células e, em seguida, adicione meio para interromper a atividade enzimática.
Transfira a suspensão para um tubo e centrifugue.
Descarte o sobrenadante contendo tripsina residual. Re-suspenda o pellet e transfira-o para um tubo.
Congele as células em nitrogênio líquido e descongele-as sobre gelo.
Repita os ciclos de congelamento-descongelamento para lisar as células, liberando os vírus.
Centrifugue, colete o sobrenadante contendo os vírus e armazene em temperatura ultra-baixa.
No sexto dia, filtre o sobrenadante através de uma malha de 0,45 micrômetros para remover qualquer debris celular e armazene o vírus da hepatite E derivad
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