Reprogramação de Células Sanguíneas Humanas em Células-Tronco Pluripotentes Induzidas Mediada por Vírus Sendai

Retire uma cultura de células mononucleares do sangue periférico humano (PBMCs).

Adicione o vírus Sendai que codifica fatores de transcrição de reprogramação. Cubra e feche a placa.

Centrifugue para aumentar o contato entre o vírus e a célula e incube.

Após a fusão do vírus, o RNA viral expressa fatores de transcrição que ativam genes de pluripotência celular e reprimem genes específicos de linhagem para iniciar o reprogramamento.

Neste período, um subconjunto de PBMCs transduzidos converte-se em células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs) e expressa proteínas de adesão.

Transfira-os para um poço revestido com matriz e centrifugue as células. Substitua o sobrenatante por um meio de crescimento.

Após a incubação, as iPSCs aderem à matriz, enquanto os PBMCs transduzidos não aderentes permanecem em suspensão.

Transfira a suspensão para um poço revestido e centrifugue. Adicione o meio ao poço original e incube ambos.

Os PBMCs transduzidos remanescentes iniciam o reprogramamento, convertem-se em iPSCs e aderem. Este passo maximiza a retenção de células reprogramadas.

Substitua o meio diariamente para sustentar o crescimento de iPSCs.

Neste procedimento, transfira as células sanguíneas para um