Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:48 min. • August 31st, 2026
Retire um cultivo celular de mamífero em fase estacionária com mínima replicação de DNA e colete o meio condicionado.
Adicione o vírus herpes simples (HSV) e incube com agitação ocasional para permitir a ligação viral. Lave para remover o vírus não ligado e restabeleça o meio condicionado.
Após a incubação, o vírus se funde com a membrana do hospedeiro, liberando o nucleocapsídeo no citoplasma.
O dsDNA viral entra no núcleo, circulariza-se e expressa proteínas virais para a replicação do DNA viral.
As proteínas virais e hospedeiras desenrolam o DNA viral e sintetizam um primer de RNA. Em seguida, o complexo da polimerase viral liga-se e alonga o primer para a síntese de DNA.
À medida que a replicação progride, adicione um análogo de nucleosídeo ao meio de cultura. Ele entra nas células e é convertido em sua forma de trifosfato.
Como a replicação do DNA do hospedeiro é mínima, o análogo é preferencialmente incorporado ao DNA viral em replicação, marcando os genomas virais.
Os genomas virais marcados estão prontos para análise proteômica downstream das proteínas associadas.
Inicie este procedimento com o cultivo de células MRC-5 conforme descrito no protocolo textual. Em seguida, dilua o HSV
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