Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 5:13 min. • August 31st, 2026
Retire os núcleos celulares contendo genomas virais, marcados com nucleotídeos modificados com alquino.
Suspenda os núcleos em uma mistura de azida de biotina e íons de cobre, e incube.
O íon cobre auxilia na ligação covalente entre o grupo azida e o alquino.
Centrifugue e descarte o sobrenadante.
Resuspenda no tampão, transfira e centrifugue para formar o pellet.
Congele rapidamente, depois descongele o precipitado para auxiliar na lise.
Resuspenda e sonique para lisar os núcleos.
Centrifugue e colete o sobrenadante contendo os complexos proteína-DNA viral.
Filtre o sobrenadante para remover contaminantes.
Dilua o filtrado.
Adicione as esferas magnéticas revestidas com estreptavidina e incube para facilitar a ligação com os complexos proteína-DNA biotinilados.
Aplique um campo magnético para coletar as esferas e lave para remover contaminantes.
Repita a lavagem.
Adicione um tampão de eluição e aqueça para separar e desnaturar as proteínas.
Separe as esferas, colete o eluato.
Congele rapidamente as proteínas isoladas. Armazene em temperaturas ultra-baixas para análises posteriores.
Após remover completamente o PBS, re-suspenda o pellet nuclear em 10 mililitros da mistura de reação de click, pipeta
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