Isolamento de Vírus Endógenos de Drosophila Selvagem Utilizando Linhagens Celulares Permissivas Modificadas

Inicie com um tubo contendo adultos anestesiados de Drosophila do mesmo sexo e espécie.

Adicione um tampão e homogeneíze para liberar populações virais endógenas e bactérias.

Centrifugue o homogenato e, em seguida, passe o sobrenadante através de uma membrana por centrifugação para remover bactérias e debris.

Transfira o filtrado para uma placa de múltiplos poços contendo culturas celulares de Drosophila modificadas que são permissivas a vírus de RNA e incube.

Os vírus entram na célula hospedeira via endocitose mediada por receptor.

Uma vez no interior, o genoma viral se replica, produzindo RNA de fita dupla (dsRNA) intermediários.

As células hospedeiras expressam uma proteína supressora que se liga ao dsRNA, impedindo sua degradação pela Dicer, a enzima de defesa do hospedeiro.

Isso permite a síntese de RNA viral e a produção de proteínas virais, promovendo a replicação e amplificação virais.

Cargas virais elevadas prejudicam o crescimento das células hospedeiras e produzem efeitos citopáticos.

Centrifugue brevemente a placa.

Colete o sobrenadante contendo as populações virais e armazene-o em baixa temperatura para análises posteriores.