Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 4:35 min. • August 31st, 2026
Inicie com células de mamífero infectadas com um adenovírus.
Realize ciclos repetidos de congelamento e descongelamento para lisar as células e liberar os vírions.
Centrifugue o lisado para formar o pellet dos detritos. Colete o sobrenadante contendo as partículas virais.
Coloque o sobrenatante viral sobre um gradiente em etapas de cloreto de césio para separação com base na densidade.
Ultracentrifugue para permitir que as partículas virais migrem de acordo com suas densidades de flutuação.
Os vírions intactos que contêm o genoma adenoviral completo são mais densos devido ao DNA empacotado e sedimentam em uma faixa mais baixa, enquanto os capsídeos vazios e detritos mais leves permanecem nas camadas superiores.
Remova as camadas superiores. Colete a faixa inferior de viriões contendo o genoma.
Re-suspenda os viriões em cloreto de césio de densidade uniforme e submeta-os novamente à ultracentrifugação para aprimorar a separação e concentrar as partículas completas.
Descarte as camadas superiores e recupere a faixa inferior.
Dialise a amostra para remover o cloreto de césio.
Os vetores adenovirais de alta pureza, contendo o genoma, estão agora prontos para aplicações posteriores.
Para preparar
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