Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:27 min. • August 31st, 2026
Inicie com tecido de fígado de rato recelularizado congelado, contendo hepatócitos humanos, embutido em meio de criopreservação.
Neste tecido, os hepatócitos transduzidos expressam a proteína fluorescente verde esmeralda (EmGFP), uma proteína repórter codificada pelo vetor viral.
Use um criostato para cortar seções finas que mantenham a arquitetura celular e tecidual. Transfira as seções para uma lâmina.
Trate as seções com um detergente suave para permeabilizar a membrana celular.
Adicione um anticorpo primário anti-EmGFP que se liga especificamente à proteína relatora fluorescente expressa nas células transduzidas.
Lave para remover os anticorpos não ligados.
Introduza um anticorpo secundário conjugado a um fluoróforo vermelho, que se liga ao anticorpo primário, e depois lave.
Adicione um corante fluorescente azul específico para DNA que se liga ao DNA celular.
Sob um microscópio de fluorescência, a colocalização da fluorescência vermelha com os núcleos corados em azul confirma que os hepatócitos transduzidos no tecido hepático expressam com sucesso a proteína reporter viral.
Usando um bisturi, corte amostras de cada lobo hepático com cerca de meio centímetro de espessura e de 1,5 a 2 cen
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