Crescimento Viral em Células do Epitélio Nasal Humano Cultivadas em Interface Ar-Líquido

Inicie com células epiteliais nasais humanas cobertas com muco, cultivadas em um inserto de transwell em uma placa de múltiplos poços.

O lado basal da cultura entra em contato com o meio, enquanto a superfície apical fica exposta ao ar, simulando a interface ar-líquido da cavidade nasal.

Lave a cultura com tampão para remover a camada de muco.

Adicione o coronavírus, suspenso em meio sem soro, à cultura.

Incube a placa com movimentos suaves ocasionais para garantir a adsorção viral.

Remova o inóculo viral e lave com tampão para remover os vírus não ligados.

Remova o inserto e reabasteça o poço com meio fresco.

Incube a placa para permitir a infecção viral.

O coronavírus liga-se ao receptor na superfície celular, entra por endocitose e libera seu genoma no citoplasma.

O genoma viral se replica e produz proteínas, que se montam em novos vírus.

Novos vírus são liberados apicalmente, espalham-se para infectar células próximas e amplificam o crescimento viral.

Cultive e diferencie as culturas de interface ar-líquido nasal, ou culturas ALI, em transwell com câmara basal e apical. Expanda as células sinonasais humanas dissociadas em condições submersas e, em seguida, remova o meio da câmara apical p