Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:51 min. • August 31st, 2026
Utilize vetores lentivirais contendo o antígeno p24 do HIV-1, uma proteína marcadora usada para detecção.
Adicione um detergente para lisar e liberar a p24, em seguida dilua a amostra em série.
Utilize uma microplaca revestida com anticorpos monoclonais anti-p24 e um agente bloqueador para prevenir ligação não específica.
Adicione as diluições das amostras e os padrões de p24 como referências.
Incube para permitir a interação do p24 com os anticorpos por meio de um epítopo específico, depois remova os componentes não ligados.
Incubar com anticorpos policlonais anti-p24 que se ligam a diferentes epítopos no p24. Remover quaisquer anticorpos não ligados.
Adicione anticorpos ligados à peroxidase que se ligam aos anticorpos policlonais. Remova os anticorpos não ligados.
Adicione um substrato de peroxidase que se converte em um produto colorido.
Adicione um ácido para inativar a peroxidase e estabilizar o produto.
Meça a absorbância correspondente à intensidade da cor, que é proporcional à concentração de p24.
Gere o gráfico padrão e estime as concentrações das amostras para determinar o título viral.
Cubra uma placa de 96 poços de alta ligação com 100 microlitros de anticorpo monoclonal anti-p24
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