Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:44 min. • August 31st, 2026
Inicie com uma mistura de plasmídeos suspensos em um meio nutricional.
O primeiro plasmídeo carrega um genoma do vírus adeno-associado recombinante (AAV) que codifica o gene de interesse.
O segundo plasmídeo codifica as proteínas Rep e Cap.
O terceiro plasmídeo codifica proteínas auxiliares.
Adicione um agente de transfeção à solução de plasmídeo. Misture bem e incube.
O agente de transfeção com carga positiva liga-se ao DNA plasmidial com carga negativa, formando complexos.
Introduza os complexos a uma monocamada de células de mamífero. Incube.
Os complexos entram nas células através da endocitose.
No interior das células, os genes codificados pelo plasmídeo induzem a expressão de proteínas virais.
A proteína Rep replica o genoma viral, enquanto as proteínas Cap formam as cápsides.
A proteína Rep, juntamente com proteínas auxiliares, empacota o genoma viral replicado nos capsídeos, formando partículas completas de AAV.
Os vetores AAV recombinantes que carregam o gene de interesse estão prontos para aplicações de entrega gênica.
Após gerar os construtos de rAAV9 e cultivar as células HEK293 conforme o protocolo descrito, para transfectar as células no primeiro dia, combine 70 microgramas do pl
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