Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 5:56 min. • August 31st, 2026
Inicie com um lisado celular contendo DNA celular agregado com proteínas celulares e partículas virais.
Adicione íons de magnésio, seguidos por uma nucleasse, para ativar a degradação enzimática do DNA celular e romper agregados de DNA–proteína.
Centrifugue para separar os detritos e coletar o sobrenadante contendo partículas virais.
Coloque o sobrenatante sobre um gradiente descontínuo de iodixanol com concentrações crescentes de cima para baixo e, em seguida, complete o tubo com tampão.
Ultracentrifugar para separar os componentes com base na densidade. As partículas virais acumulam-se na interface entre as camadas de alta e média densidade.
Insira uma agulha nesta interface e colete as partículas virais em um tubo.
Adicione um tampão contendo componentes estabilizantes, que previne a agregação das partículas virais.
Em seguida, transfira a solução para um tubo com um filtro de membrana.
Centrifugue para concentrar as partículas virais acima do filtro.
Adicione o tampão suplementado com agente estabilizante e centrifugue novamente para obter partículas virais purificadas.
Para colher as células transfectadas, desprenda e suspenda as células utilizando o meio de cultura para pipetar para ci
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