Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 4:23 min. • August 31st, 2026
Inicie com uma lâmina contendo células hospedeiras infectadas pelo vírus e permeabilizadas, onde os RNAs virais estão distribuídos entre os compartimentos nuclear e citoplasmático.
Adicione um tampão de pré-hibridização e incube em condições úmidas.
No tampão, os reagentes de bloqueio inibem sítios de ligação inespecíficos, enquanto os inibidores de RNase inativam as RNases e preservam a integridade do RNA.
Remova o tampão e adicione as sondas de oligonucleotídeos desnaturadas e marcadas com digoxigenina complementares ao RNA viral.
Incube no escuro para permitir a hibridização da sonda com o RNA, depois lave repetidamente.
Adicione um fixador para estabilizar os híbridos de sonda-RNA e, em seguida, lave repetidamente. Adicione um tampão suplementado com detergente para manter a permeabilidade celular.
Adicione um anticorpo anti-digoxigenina conjugado a um fluoróforo verde que interaja com a digoxigenina, depois lave repetidamente.
Fixe as células para preservar os complexos, depois lave novamente.
Adicione um corante intercalante de DNA para corar os núcleos. Lave o corante em excesso repetidamente.
Monte com uma lamínula e a selar.
Sob um microscópio confocal, visualize a fluorescência ver
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