Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:52 min. • September 30th, 2026
Inicie com um cultivo bacteriano que contenha um genoma de profago integrado, reprimido por uma proteína repressora de fago, mantendo uma fase lisogênica dormente.
Adicione um indutor e incube com agitação para induzir estresse celular.
O estresse celular induz a autoclívagem da proteína repressora, permitindo ao profago transicionar da lisogenia para a replicação lítica.
O DNA do profago é excisado do genoma bacteriano e transcreve sequencialmente os genes reguladores precoces, os genes de replicação do DNA intermediários e os genes estruturais e de lise tardios.
Transfira a cultura para um grande volume de meio para diluir o indutor e incube para permitir a recuperação celular.
Em intervalos definidos, adicione uma solução de parada para interromper a transcrição e preservar o perfil de RNA nas células bacterianas.
Centrifugue a cultura e descarte o sobrenadante. Reuspenda as células, transfira a suspensão para um tubo pequeno e centrifugue.
Remova o sobrenadante e congele rapidamente o pellet para manter a integridade do RNA.
Finalmente, adicione um reagente de extração de RNA e homogeneíze para romper as células. A amostra está pronta para o isolamento de RNA e análise transcritômica s
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