Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:06 min. • August 31st, 2026
Inicie com uma câmara de células multicamada contendo células de mamífero transfectadas que produzem vetores de vírus adeno-associados. A câmara de células ajuda a gerar uma colheita viral de alto rendimento.
Agite vigorosamente o recipiente para desprender as células aderentes, liberando as células contendo vírus e as partículas virais extracelulares no meio.
Transfira o conteúdo para um tubo e centrifugue para obter um pellet das células contendo o vírus.
Colete o sobrenadante contendo o vírus extracelular e transfira-o para um frasco de armazenamento.
Re-suspenda o pellet no tampão de lise e incube.
As enzimas e detergentes no tampão lisam as células e liberam os vírus intracelulares intactos na solução.
Centrifugue o lisado para obter o pellet dos detritos celulares. Colete o sobrenadante contendo o vírus e adicione-o ao mesmo frasco de armazenamento que contém o vírus extracelular.
Armazene a suspensão viral bruta em baixa temperatura até a purificação subsequente.
Após a incubação, agite vigorosamente a câmara de cultura celular para desprender as células até que o meio pareça turvo, e despeje-o em quatro tubos de centrífuga de 500 mililitros.
Pelotize as células por centrifugação a 1
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