Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:35 min. • August 31st, 2026
Inicie com um lisado celular filtrado contendo vetores de vírus adeno-associado (AAV) e contaminantes derivados do hospedeiro.
Passe o lisado através de uma coluna de afinidade baseada em heparina.
As proteínas do capsídeo viral ligam-se eletrostaticamente aos grupos de heparina com carga negativa.
Lave a coluna com um tampão para remover contaminantes não ligados.
Adicione um tampão contendo detergente para solubilizar os detritos membranosos.
Enxágue novamente com o tampão sem detergente.
Introduza um tampão suplementado com cátions para criar um ambiente iônico, depois lave com um tampão de sal moderado para liberar impurezas fracamente ligadas.
Adicione um tampão de alta salinidade para interromper as interações entre a cápside e a heparina e eluir as partículas virais.
Colete as frações de eluição enriquecidas com partículas virais intactas e transfira-as para tubos concentradores centrífugos equipados com membranas de filtro.
Centrifugue os tubos para remover o tampão em excesso e, em seguida, colete as frações virais concentradas em um tubo.
Lave a membrana com o tampão para recuperar partículas virais residuais e maximizar o rendimento.
Deixe o lisado bruto descongelar a quatro graus
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos