Transdução de Embriões Fertilizados de Rato Baseada em Vetores Lentivirais
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:07 min. • August 31st, 2026
Utilize uma placa de microinjeção com uma gota de meio de cultura de embriões no centro, coberta com óleo mineral para prevenir a evaporação.
Coloque a placa sob um microscópio invertido.
Posicione uma capilar de microinjeção e uma pipeta de contenção em um conjunto de micromanipulador sob o microscópio.
A capilar de microinjeção é carregada com uma suspensão de vetores lentivirais contendo o transgene.
Em seguida, transfira os embriões de rato fertilizados para o meio.
Segure um embrião usando a pipeta de contenção aplicando sucção.
Com maior aumento, insira a capilar de microinjeção através do revestimento extracelular de glicoproteína do embrião, a zona pelúcida, e injete a suspensão lentiviral no espaço perivitelino.
Em seguida, transfira os embriões injetados para uma placa de cultura e incube.
O vírus entra no embrião e libera seu genoma contendo o transgene no citoplasma.
Posteriormente, ele é transcrito reversamente em DNA e integra-se ao genoma do embrião, incorporando o transgene.
Os embriões transduzidos estão agora prontos para o processamento.
Para a microinjeção de vetores lentivirais sob a zona pelúcida de embriões em estágio de uma célula, utilize um puxador de pipetas para pr
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