Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:25 min. • September 30th, 2026
Utilize uma placa de múltipos poços contendo células epiteliais de mamífero.
Prepare diluições seriadas de um pseudovírus contendo proteínas do espigão do coronavírus.
Substitua o meio por uma suspensão viral diluída em cada poço.
Incubar com agitação ocasional para permitir que as proteínas do pico viral se liguem ao receptor da célula hospedeira.
Remova o meio. Adicione um meio contendo metilcelulose para formar uma camada semissólida que restrinja a disseminação viral e incube.
O vírus entra na célula e libera seu genoma de RNA.
O RNA orienta a síntese de novo RNA viral e proteínas, que se montam em partículas virais que saem da célula.
Os vírus liberados infectam células vizinhas, produzindo uma zona clara chamada placa.
Remova a camada de sobreposição e lave as células.
Adicione um corante e incube a placa com agitação.
Lave e seque os poços.
O corante cora as células, enquanto as placas permanecem claras.
Conte as placas visíveis em cada poço para determinar a concentração viral.
Para determinar o título viral, plaque células Vero E6 em placas de seis poços com uma densidade de semeadura de seis vezes 10 à quinta células por poço e incube durante a noite. No dia seguinte, prepare uma séri
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