Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 4:09 min. • September 30th, 2026
Inicie com uma placa de múltiplos poços contendo células de mamífero expostas a um vírus vaccinia recombinante.
O vírus recombinante codifica proteínas fluorescentes verde, vermelha e azul, cada uma controlada por um promotor específico de estágio, para acompanhar os estágios inicial, intermediário e tardio da expressão gênica, respectivamente.
O vírus entra na célula por endocitose mediada por receptor e libera seu núcleo viral no citoplasma.
A maquinaria transcricional no interior do vírion impulsiona a expressão de genes precoces, marcada pela fluorescência verde.
As proteínas precoces medeiam a desencapsidagem do genoma, liberando o DNA viral no citoplasma, onde a DNA polimerase replica o genoma viral.
Em seguida, a expressão de genes intermediários, indicada pela fluorescência vermelha, produz fatores de transcrição essenciais para a ativação dos genes tardios.
Em seguida, a expressão de genes tardios, indicada pela fluorescência azul, gera proteínas estruturais necessárias para a formação de vírions maduros.
Adicione um fixador e incube brevemente para preservar a fluorescência.
Remova o fixador e, em seguida, adicione um tampão.
Utilize um espectrofotômetro para medir a fluorescência
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