Isolamento e Purificação de Vírus de Corpos de Insetos Infectados

Utilize corpos de insetos infectados pelo vírus suspensos em um tampão contendo um agente quelante.

Homogeneíze para romper os tecidos do inseto e liberar componentes intracelulares, incluindo partículas virais e íons metálicos reativos.

O agente quelante liga-se a íons metálicos, impedindo a formação de espécies reativas de oxigênio e protegendo as partículas virais contra danos oxidativos.

Ultracentrifugue para formar o pellet do vírus e dos detritos insolúveis, em seguida descarte o sobrenadante.

Adicione um tampão contendo sais e detergente, então ressuspenda o precipitado por pipetagem repetida. O detergente dissolve os detritos ricos em lipídios para liberar as partículas virais associadas.

Centrifugue para formar o pellet dos detritos insolúveis. Colete o sobrenadante contendo as partículas virais.

Filtre o sobrenadante para remover detritos residuais e colete o filtrado contendo o vírus.

Dialise o filtrado em água a uma temperatura baixa para remover o detergente em excesso e os sais do tampão.

Substitua a água periodicamente até que as partículas virais precipitem. O vírus está pronto para uso posterior.

Homogeneíze corpos inteiros de H. vitripennis positivos para o vírus em tampão