Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:31 min. • September 30th, 2026
Inicie com um cultivo de células de mamífero em um meio com baixo teor de soro.
Adicione o complexo DNA-lipídio às células.
O complexo contém plasmídeos de empacotamento lentiviral e um plasmídeo de expressão que codifica o gene de interesse.
Incubar para permitir a entrada celular do complexo.
Substitua o meio para remover o reagente de transfeção residual e incube.
No interior da célula, os DNAs plasmidiais entram no núcleo e orientam a síntese de RNA viral carregando o gene de interesse e componentes virais, incluindo proteínas do capsídeo e envelope, transcriptase reversa e integrase.
Esses componentes se montam em partículas lentivirais recombinantes que brotam da membrana do hospedeiro.
Colete o meio contendo as partículas virais liberadas.
Centrifugue para formar um pellet de detritos celulares e filtre o sobrenadante viral para remover contaminantes residuais.
Centrifugue em alta velocidade para obter um pellet de partículas virais intactas.
Descarte o sobrenadante e ressuspenda o pellet viral em um pequeno volume de meio fresco.
Armazene o lentivírus recombinante concentrado em baixa temperatura para aplicações posteriores.
Para iniciar a produção do lentivírus concentrado, plaque 1,5
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