Ensaio Baseado em Luciferase para Avaliar Compostos Antivirais em Células de Rim Embrionário Humano

Inicie com uma placa de múltipos poços contendo uma diluição seriada do composto em teste para avaliar a atividade antiviral.

Adicione uma suspensão de células de rim embrionário humano contendo o vírus do sarampo recombinante que expressa luciferase a cada poço.

Incubar para permitir que as células adiram ao fundo de cada poço.

No poço controle sem o composto em teste, o vírus se funde com a membrana celular e libera seu genoma no citoplasma.

O genoma viral orienta a produção de RNA e proteínas virais, juntamente com a proteína repórter luciferase.

Nas poços de teste, o composto antiviral inibe a replicação viral, reduzindo a produção de luciferase.

Adicione um substrato específico para luciferase a cada poço, que interage com a luciferase e emite luminescência.

Utilize um leitor de placas para medir a intensidade da luminiscência em cada poço.

Luminescência mais baixa nos poços de teste em comparação com o poço controle indica inibição viral.

Uma diminuição progressiva da luminiscência com o aumento da concentração do composto indica inibição dose-dependente da replicação viral.

Adicione um microlitro da placa de diluição do composto à placa de cultura tecidual branca com código de barras.