Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:56 min. • September 30th, 2026
Obtenha uma suspensão contendo uma mistura diversificada de vírus, juntamente com contaminantes como partículas virais defeituosas que carecem de ácidos nucleicos.
Esses vírus são previamente corados com um corante fluorescente que se liga ao ácido nucleico para distinguir vírus com genomas de contaminantes.
Passe a suspensão por um classificador celular ativado por fluorescência, no qual cada partícula é analisada quanto à dispersão da luz e à intensidade de fluorescência.
O sinal de dispersão de luz reflete o tamanho da partícula, enquanto a intensidade da fluorescência indica o conteúdo de ácidos nucleicos.
Exclua contaminantes que não apresentam fluorescência e agregados que exibem fluorescência anormalmente alta.
Selecione partículas virais individuais que contenham um genoma e separe-as diretamente em uma lâmina com câmara revestida com agarose para imobilização.
Cubra cada poço com agarose adicional para incorporar os vírus.
Estes estão agora prontos para amplificação e análise do genoma de vírus individuais.
Para classificar vírus usando um citômetro de fluxo equipado com tubos fotomultiplicadores de dispersão frontal personalizados ou FSC-PMT, comece diluindo as partículas virais
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