Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:37 min. • September 30th, 2026
Inicie com um sobrenadante de cultura celular de mamífero contendo o vírus da hepatite C.
Dilua sequencialmente a suspensão viral no meio de crescimento.
Inocule cada diluição em uma monocamada de células de hepatoma e incube.
O vírus entra nas células, libera seu genoma e expressa proteínas virais, incluindo a proteína de replicação não estrutural.
Isso produz novas partículas virais que brotam e infectam células vizinhas, formando um foco de células infectadas.
Após a incubação, remova o meio e adicione um fixador. Incube em temperatura fria para fixar as células e permeabilizar a membrana.
Lave e adicione um tampão de bloqueio para prevenir a ligação não específica de anticorpos.
Introduza anticorpos primários que se ligam à proteína de replicação não estrutural.
Lave para remover os anticorpos não ligados.
Em seguida, introduza anticorpos secundários conjugados a fluoróforos que se ligam aos anticorpos primários.
Lave novamente para remover os anticorpos não ligados. Adicione um corante intercalante de DNA para corar os núcleos.
Visualize sob microscópio de fluorescência e quantifique os focos fluorescentes para determinar a concentração do vírus no sobrenadante.
Plaque células Huh-7.5.1 i
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