Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:35 min. • September 30th, 2026
Utilize culturas de células de mamíferos. Infete a cultura de teste com um vírus, deixando a cultura controle sem infecção.
Permita a adsorção do vírus, depois substitua o meio.
O vírus entra na célula e libera seu genoma. O vírus expressa uma proteína de virulência que desestabiliza os complexos de fatores de transcrição do hospedeiro e suprime a transcrição do hospedeiro.
No entanto, as células controle mantêm a transcrição ativa.
Adicione um análogo de nucleosídeo que seja incorporado aos RNAs recém-sintetizados.
Colete as células lavadas.
Fixe as células para preservar sua estrutura. Centrifugue as células e lave-as com um tampão.
Adicione um detergente para permeabilizar as células, depois lave.
Adicione um corante fluorescente quimicamente modificado que reaja com o análogo de nucleosídeo para marcar os RNAs recém-sintetizados; em seguida, lave.
Realize uma imunomarcação para rotular fluorescentemente antígenos virais, marcando as células infectadas.
Utilize citometria de fluxo para detectar a fluorescência do RNA do hospedeiro e do antígeno viral.
Compare a intensidade da fluorescência de RNA entre as populações controle e testada. Uma redução na população testada, indicando diminuição
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