Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:36 min. • September 30th, 2026
Inicie com um cultivo de células epiteliais renais humanas cultivadas em um meio rico em nutrientes.
Substitua o meio por um meio com soro reduzido para minimizar a interferência do soro e melhorar a eficiência de transfeção.
Adicione a mistura de transfeção gota a gota às células.
A mistura contém um construto de DNA retroviral carregando o gene de interesse, um plasmídeo de empacotamento que fornece proteínas virais essenciais e polietilenimina, que forma complexos com o DNA plasmidial para facilitar a transfeção.
Incube as células para permitir a captação do complexo de DNA.
Substitua o meio para remover os reagentes residuais de transfeção.
No interior da célula, o DNA plasmidial entra no núcleo, onde orienta a produção de proteínas virais e de RNA viral carregando o gene de interesse.
Esses componentes se montam e brotam para o meio como partículas retrovirais recombinantes.
Colete o meio contendo o vírus e armazene-o brevemente em baixa temperatura para manter a estabilidade viral.
Centrifugue para obter o pellet dos detritos celulares.
Aliquote o sobrenadante viral, congele rapidamente em nitrogênio líquido e armazene em baixa temperatura para experimentos posteriores de transferência
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos