Geração de Vírus Sincicial Respiratório Recombinante Marcado com GFP Utilizando um Sistema de Expressão T7

Inicie com uma mistura de plasmídeos contendo plasmídeos auxiliares que codificam proteínas de replicação e transcrição do VSR e um plasmídeo separado que carrega um cDNA de antígenoma completo do VSR que expressa GFP.

Cada plasmídeo é colocado sob controle de um promotor T7.

Adicione um reagente de transfeção baseado em lipossomos e incube para permitir a formação de complexos.

Introduza esses complexos em células renais de hamster geneticamente modificadas que expressam a polimerase de RNA T7 e incube.

Os complexos de plasmídeo entram nas células, onde a polimerase de RNA T7 transcreve os plasmídeos de RSV.

Isso produz RNAs mensageiros virais que codificam proteínas de replicação e transcrição e gera RNA antigênomico de RSV de sentido positivo.

Utilizando a maquinaria da célula hospedeira, esses RNAs mensageiros produzem proteínas de replicação e transcrição virais que formam um complexo polimerase funcional do VSR.

O complexo da polimerase do VSR então converte o RNA de sentido positivo em RNA genômico viral.

Esse RNA genômico direciona a síntese de RNAs mensageiros virais, que codificam proteínas estruturais e GFP.

Sob um microscópio de fluorescência, a fluorescência verde confirma a ex