Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 4:32 min. • September 30th, 2026
Realize diluições seriadas de uma suspensão de vírus respiratório sincicial (RSV).
Inocule cada diluição em poços separados de uma placa de múltiplos poços semeados com células de mamífero suscetíveis ao VSR.
Incube para permitir que o vírus se ligue aos receptores da superfície celular, media a fusão da membrana e libere seu genoma no citoplasma.
Em seguida, aplique um meio de sobreposição semi-sólido para restringir a difusão viral e incubar.
As células infectadas expressam a proteína de fusão viral que media a fusão de célula a célula, formando estruturas multinucleadas denominadas sincícia.
À medida que a replicação viral progride, esses sincícia degeneram e formam zonas claras conhecidas como placas.
Agite suavemente a placa para remover a camada de revestimento e lave as células para eliminar detritos.
Adicione um corante para corar as células viáveis, deixando as placas sem coloração.
Remova o corante, descontamine a placa com hipoclorito e enxágue com água.
Deixe a placa secar ao ar.
Selecione poços com placas distintas e conte-os para determinar o título viral.
Para realizar um ensaio de titulação por placas, prepare primeiro o meio mínimo essencial 2X diluindo o MEM 10X comercial co
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos