Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:35 min. • September 30th, 2026
Colete os sobrenadantes de cultura contendo viriões descendentes liberados de células hospedeiras infectadas com uma variante de teste do HIV-1 ou com um controle do tipo selvagem.
O vírus de teste possui uma variante gênica que altera a eficiência de replicação e afeta a produção de viriões descendentes.
Adicione os sobrenadantes a uma mistura de transcrição reversa contendo um nucleotídeo radiomarcado, um nucleotídeo não marcado, um molde de RNA, um iniciador, fatores cofatores, detergente e estabilizadores.
Incube para permitir a formação do complexo molde-primer enquanto o detergente lisa os viriões, liberando a transcriptase reversa, ou RT.
A RT sintetiza DNA a partir do complexo molde-primer, incorporando o nucleotídeo radiomarcado.
Transfira as amostras para uma membrana de ligação a ácidos nucleicos e seque ao ar para imobilizar o DNA marcado com radiação.
Lave repetidamente com tampão e etanol sob agitação para remover componentes não ligados.
Seque e enrole a membrana. Exponha-a a uma tela sensível à radiação e detecte os sinais utilizando um fosforimager.
Um sinal reduzido no teste indica níveis mais baixos de RT, refletindo uma produção diminuída de virions em comparação com o
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos