Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:31 min. • September 30th, 2026
Inicie com uma placa de múltiplas poças contendo células epiteliais infectadas com um vírus geneticamente modificado.
O vírus carrega um transgene que codifica uma enzima luciferase.
Utilize culturas frescas de células epiteliais em uma placa multiwell com paredes brancas.
Transfira o sobrenatante contendo concentrações desconhecidas de vírus para os poços com paredes brancas.
Simultaneamente, adicione concentrações conhecidas do vírus como padrões.
Centrifugue a placa para promover o contato próximo entre as partículas virais e os receptores da superfície celular do hospedeiro, e incube.
O vírus entra na célula hospedeira e entrega seu genoma de RNA de fita negativa.
A polimerase viral transcreve então o genoma em mRNA.
Utilizando a maquinaria celular do hospedeiro, o mRNA é traduzido em proteínas virais, incluindo a luciferase.
A quantidade de luciferase acumulada dentro da célula hospedeira aumenta com o aumento da concentração viral.
As amostras estão prontas para a estimativa adicional das concentrações virais utilizando o ensaio de luciferase.
Prepare uma curva padrão de VSV-Delta-51 em DMEM sem soro, de modo que a concentração final de unidades formadoras de placas por mililitro após a
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