Geração de Células-Tronco Embrionárias de Camundongo Infectadas por Lentivírus

Inicie com lentivírus carregando um gene de resistência a antibióticos.

Centrifugue para separar os detritos. Colete o sobrenadante contendo os vírus e passe-o por uma membrana livre de surfactante.

Isso permite que os lentivírus passem, retendo ao mesmo tempo contaminantes.

Ultracentrifugue para concentrar os vírus. Remova o sobrenadante e adicione tampão para ressuspender os vírus.

Em seguida, transfira a suspensão para um tubo de microcentrífuga e vortexie-a.

Centrifugue para remover bolhas. Em seguida, adicione os vírus a um meio de infecção contendo células-tronco embrionárias de camundongo e misture.

Centrifugue para aumentar o contato entre o vírus e a célula, em seguida incube.

Os vírus entregam seus genomas nas células.

Remova o meio, adicione meio fresco e incube.

O genoma viral é convertido em DNA e integra-se ao genoma do hospedeiro, permitindo a produção de mRNA que orienta a síntese da proteína de resistência ao antibiótico.

Substitua o meio por meio fresco suplementado com o antibiótico de seleção e incube.

As células que expressam a proteína de resistência ao antibiótico sobrevivem, resultando em células estáveis e infectadas pelo vírus.

Conte as células com um hemocitômetro.

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