Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:41 min. • September 30th, 2026
Retire um tubo contendo uma cultura inicial de células de E. coli modificadas, portadoras do gene da polimerase T7 regulado pelo operador lac, juntamente com um plasmídeo de expressão.
O plasmídeo carrega um gene que codifica uma proteína do capsídio derivada do bacteriófago Qβ.
Esse gene é regulado por um promotor T7 e um operador lac.
Transfira a cultura para um frasco contendo um meio.
Incube com agitação para promover o crescimento bacteriano.
Adicione um análogo sintético da alolactose que inativa o repressor lac, desencadeando a expressão da polimerase T7.
A polimerase T7 então se liga ao promotor T7 no plasmídeo e transcreve o gene da proteína do capsídio, que é traduzido para produzir a proteína do capsídio.
Essas proteínas do capsídio se autoagrupam em partículas semelhantes a vírus (VLPs) que formam esqueletos não infecciosos.
Transfira a cultura para frascos de centrífuga.
Centrifugue para obter o pellet celular.
Descarte o sobrenadante e transfira o pellet para um tubo.
O pellet celular, contendo VLPs intracelulares, está pronto para purificação.
Antes de iniciar o procedimento para expressar o bacteriófago Q-Beta, limpe a área da bancada com uma solução de hipoclorito:etanol na pr
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