Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 3:06 min. • September 30th, 2026
Inicie com um monocamada de células aderentes e permissivas ao vírus.
Lave as células, em seguida adicione um agente dissociante para destacá-las.
Centrifugue e descarte o sobrenatante. Lave as células para remover o meio residual.
Re-suspenda as células em solução salina tamponada e, em seguida, transfira as células para uma cubeta.
Introduza o RNA transcrito de um clone de cDNA de comprimento completo do vírus da encefalite japonesa (JEV) mantido em um cromossomo artificial bacteriano.
Aplique pulsos elétricos para permeabilizar temporariamente a membrana celular, permitindo a entrada de RNA.
Deixe as células se recuperarem, então transfira-as para um meio de cultura.
O RNA introduzido imita o RNA viral nativo para produzir novos viriões.
Dilua as células em série e plaque-as em monocamadas celulares frescas.
Incube para permitir que os vírions infectem as células vizinhas.
Cubra com meio de ágar e incube. O meio forma uma camada semissólida, restringindo a disseminação viral para células próximas.
As células infectadas lisam e formam placas discretas, confirmando o resgate bem-sucedido do JEV infeccioso.
Inicie com células BHK-21 cultivadas por 24 horas em placas de 150 milímetros semeadas
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos