Preparação Segura de Espécimes Virais para Microscopia Eletrônica de Transmissão

Dentro de uma cabine de contenção biológica, aspire uma suspensão viral altamente contagiosa para dentro de uma cápsula contendo grades de microscopia eletrônica de transmissão (MET).

Incubar na posição horizontal para ajudar os vírus a aderirem uniformemente à grade.

Remova a suspensão com vírus não ligados, então adicione um fixador para promover a reticulação de proteínas, o que preserva a estrutura viral e reduz a infectividade.

Após a incubação, lave para remover o fixador residual.

Adicione uma coloração negativa densa aos elétrons, que se liga às grades ao redor do vírus e aumenta o contraste durante a imagem.

Remova a pipeta e borre as grades para eliminar o corante em excesso.

Coloque a cápsula em um tubo de centrífuga com papel filtro embebido em tetróxido de ósmio, depois feche o tubo e incube para fixação por vapor.

O tetróxido de ósmio estabiliza a estrutura da membrana lipídica, melhora o contraste da imagem e inativa completamente o vírus, permitindo sua transferência segura para fora do biocontenção.

Dentro de uma instalação de MET, enxágue as grades, deixe-as secar ao ar e armazene-as para a obtenção de imagens.

Este método garante um manuseio mais seguro de amostras virais