Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:36 min. • September 30th, 2026
Inicie com um complexo nucleoproteína–fosfoproteína livre de RNA, expresso de forma recombinante e específico para um vírus.
Incube o complexo com oligonucleotídeos de RNA específicos do vírus para iniciar a montagem de partículas semelhantes a nucleocapsídeos.
Durante a montagem, o RNA viral desloca o fragmento da fosfoproteína, permitindo que a nucleoproteína envolva o RNA, formando partículas semelhantes a nucleocapsídeos.
Centrifugue a amostra para remover qualquer precipitado.
Utilize uma coluna de cromatografia de exclusão por tamanho previamente equilibrada, preenchida com uma resina porosa, e aplique o sobrenadante sobre ela.
À medida que a amostra flui através da coluna, os complexos de nucleocapsídeo maiores são excluídos dos poros e eluem primeiro.
Complexos proteicos de tamanho médio e moléculas pequenas de RNA entram nos poros e eluem mais tarde.
Monitore a absorbância do eluato para gerar um perfil de eluição com picos distintos.
O primeiro pico mostra nucleocapsídeos montados, seguidos por complexos proteicos menores e RNA livre.
Colete a fração que corresponde ao pico de nucleocapsídeo para validação e análises adicionais.
Para a montagem de nucleocapsídeos específicos do vír
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