Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:37 min. • September 30th, 2026
Inicie com uma placa de múltipos poços contendo células epiteliais infectadas com o vírus Zika, um vírus de RNA de fita simples.
Durante a infecção, o vírus libera o RNA que forma um intermediário de RNA de fita dupla ou dsRNA.
Para detectar esses intermediários de dsRNA, substitua o meio por metanol para permeabilizar as células e preservar a integridade celular.
Remova o metanol e lave com um tampão.
Adicione uma solução bloqueadora para evitar a ligação não específica de anticorpos.
Adicione um anticorpo primário específico para o dsRNA viral.
Incube com agitação suave em baixa temperatura para permitir que o anticorpo primário se ligue ao dsRNA viral.
Lave com um tampão, adicione um anticorpo secundário conjugado a um fluoróforo vermelho e incube.
Os anticorpos secundários ligam-se aos anticorpos primários.
Lave com um tampão, depois adicione um corante fluorescente ligante de DNA para corar o núcleo.
Observe sob microscópio de fluorescência para visualizar o intermediário de dsRNA viral marcado dentro da célula infectada.
Para imunocitoquímica, remova o meio dos poços da placa de 12 poços e adicione um mililitro de metanol a cada poço. Deixe as células fixarem a quatro graus Celsius por
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