Métodos para avaliar Mediated Beta Morte celular por linfócitos T citotóxicos

O diabetes tipo um é uma doença autoimune na qual as células beta pancreáticas secretoras de insulina são destruídas por células T autorreativas. Compreender os mecanismos envolvidos fornecerá insights para gerar uma cura eficaz para esta doença. Aqui, dois métodos para observar a destruição mediada por células T positivas para cd oito específicas de células beta pancreáticas in vitro são demonstrados: um ensaio de linfocitotoxicidade mediada por células à base de cromo 51 ou LMC e um ensaio visual de LMC para ambos os métodos.

CD oito células efetoras T positivas são preparadas primeiro para baços de camundongos realizarem Um ensaio de LMC, tricotar uma ou quatro células-alvo beta são marcadas com cromo 51 e co-cultivadas com células efetoras. Quando as células beta alvo são mortas, o cromo 51 é liberado. Os sobrenadantes e lisados celulares são então coletados e os níveis de radioatividade que indicam a extensão da morte celular são medidos usando um contador gama para realizar um ensaio visual de LMC Malha um e malha quatro As células beta alvo são marcadas com corante potencial mitocondrial As células efetoras TM RM são marcadas com pico verde.