Name: Fundição vascular cerebral do rato adulto for Imaging 3D e Análise morfológica (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-30T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 42 s
Description: Aprenda a técnica de fundição vascular cerebral em camundongos adultos para visualização 3D da árvore vascular. Este método utiliza perfusão intracardíaca com agente de moldagem e preparação tecidual para análise morfológica detalhada.

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Os autores agradecem Voltaire Gungab de assistência com a preparação do manuscrito. Este trabalho foi apoiado em parte por concessões: o National Institutes of Health (T32 GM008440 para EJ Walker, R01 NS27713 a WL Young, P01 NS44155 a WL Young e H. Su) e R21 NS070153 para H. Su, eo norte-americano Heart Association (AHA 10GRNT3130004 para H. Su).

1. Limpeza de sangue de Vascularização <ol><li> Anestesiar rato por injeção intraperitoneal de ketamina 100 mg / kg de xilazina com 10 mg / kg diluído em solução salina 0,25 ml. </li><li> Uma vez que a anestesia foi confirmada por nenhuma resposta a uma pitada de pata, use a tesoura para fazer uma incisão no peito com uma tesoura, logo abaixo do apêndice xifóide, corte através do diafragma, e retira-se entre o segmento dorsal e ventral das costelas para expor cavidade torácica. Expor o coração, dobrando-se esterno e parede torácica adjacente e seguro com pinça hemostática. Abra o saco pericárdico com pinças para expor o coração. </li><li> Ligue bomba de perfusão (100mmHg de pressão) conectado a quente PBS acrescido de heparina (5 unidades / ml) solução em banho de água quente a 37 ° C e os tubos com uma agulha de calibre 22 sem corte na saída. </li><li> Inserir a agulha para o ventrículo esquerdo, perto do ápice do coração. Imediatamente cortado do átrio direito para permitir saída arterial sistêmica e continue lavando até que o sangue is retirado de circulação. </li></ol> 2. Perfusão de agente de elenco no Sistema Vascular <ol><li> Prepare Microfil (Flow Tech, Inc. Carver, MA) Solução de fundição por protocolo do fabricante: Misturar 5 ml de diluente MV com 4 ml de composto MV filtrada. Adicionar 450μl (5%) de catalisador (MV agente de cura). Tempo de solução de trabalho é de 20 minutos, mas mistura imediatamente antes do uso para assegurar viscosidade adequada. </li><li> Retirar fundição solução de agente para uma seringa de 10 ml, juntar uma agulha de calibre 20 e blunt a seringa e agulha preencher com a solução. </li><li> Inserir a agulha para o ventrículo esquerdo através do mesmo buraco utilizado para a lavagem do sangue. Agulha segura no lugar com pinça hemostática no coração. </li><li> Injectar a solução lentamente agente de elenco para o ventrículo esquerdo em cerca de 3 ml / min. Excesso de pressão pode levar ao incorreto de fluxo de agente de elenco ou ruptura navio potencial. </li><li> Olhe para os sinais de perfusão de sucesso, incluindo: visualização do elencoing agente no intestino e fígado vasculatura, descoloração membro distal, e nariz e descoloração da língua. Reajuste agulha se necessário para alcançar a perfusão adequada. </li></ol> 3. Coleta e Processamento de Tecido <ol><li> Remover cérebro e colocar em paraformaldeído a 4% durante a noite a 4 ° C. </li><li> Desidratar cérebro, colocando de paraformaldeído diretamente em EtOH cada vez mais concentrados em temperatura ambiente: 25% EtOH, 1 dia, 50% EtOH, 1 dia, 75% EtOH, 1 dia, 95% EtOH, 2 dias, e 100% EtOH, 2 dias . </li><li> Esclarecer o tecido cerebral ao redor dos vasos sanguíneos por imersão do cérebro perfundidos em salicilato de metila por 2 dias à temperatura ambiente. </li><li> Vascularização do cérebro unsectioned todo esclarecidas podem ser visualizados com o cérebro imerso em salicilato de metila sob um microscópio de dissecação (Fig. 1) (Leica MZFL microscópio III, Leica Microsystems, Bannockburn, IL) ou microscópio de campo claro (Fig. 2) (Leica DM / LS, Leica Microsystems). </li><li> Reclarificationpode ser feito se o tecido não está completamente esclarecido. De metil salicilato de transferência do cérebro, para EtOH 95% para 2 dias, 100% EtOH por 2 dias, e salicilato de metila por 2 dias. </li></ol> 4. Micro-CT imagem ou de Preparação de aplicação de tecidos-histológica <ol><li> O cérebro pode ser fotografada usando micro-CT logo após esclarecimento ou após a re-hidratação (Fig. 4). </li><li> Para preparar o tecido cerebral para análise histológica, reidratar o cérebro através de EtOH diluída serial: 100% EtOH, 1 dia, 95% EtOH, 1 dia, 75% EtOH, 1 dia, 50% EtOH, 2 dias, 25% EtOH, 2 dias ; loja e na PBS. O cérebro pode então ser embebidos em parafina usando um procedimento padrão. </li></ol> 5. Resultados representante Após vazamento vascular, o cerebrovasculature pode ser visto macroscopicamente na superfície do cérebro (Fig.1a). A árvore vascular no interior do parênquima podem ser visualizados seguinte esclarecimento (Figura 1B). A estrutura detalhada vascularpodem ser visualizados e analisados ​​sob um microscópio de campo claro (Fig. 2), dissecando escopo (Fig. 3), e com micro-tomografia computadorizada (Fig. 4). Usando a microscopia de campo claro, a vasculatura podem ser vistos em diferentes planos focais, sem seccionamento do cérebro (Fig. 2A), bem como microvasos individuais em maior ampliação (Fig. 2B). De acordo com um escopo de dissecação, pode-se ver toda a estrutura vascular em um plano focal, permitindo melhor visualização da estrutura tridimensional do cerebrovasculature (Fig. 3). Imagens tiradas em um microscópio de dissecação pode mostrar a morfologia de grandes vasos e vascularização do cérebro inteiro, mas falta os detalhes mostrados em fotos tiradas com a microscopia de campo claro (Fig. 2B). Esta técnica permitiu-nos detectar embarcações irregulares no nosso modelo experimental do rato BAVM adulto 2. A Figura 5 mostra um exemplo de as mesmas embarcações irregulares detectadas pelo micro-tomografia computadorizada (Fig. 5A) e microscópio de campo claro (Fig. 5B). Juntos, esses dados mostram que podemos analisar tele mesma amostra com múltiplas ferramentas de imagem após a fundição vascular. <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/2958/2958fig1.jpg"> Figura 1. Cérebro de camundongo inteiro seguinte elenco vascular. Antes (A) e após (B) Clarificação por salicilato de metila solvente. Vasos podem ser claramente visualizados na superfície do cérebro (A) e no parênquima procedimento seguinte esclarecimento (B). <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/2958/2958fig2.jpg"> Figura 2. Brightfield imagens de microscópio do cérebro vascular casted esclareceu. Cérebro pode ser trabalhada em vários planos e níveis de ampliação diferentes. Escala Bar 200μm (A) e 50 ìm (B). <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/2958/2958fig3.jpg"> Figura 3. Dissecando imagem do microscópio em 1x mostrando todo adulto cerebrovasculature cérebro de camundongo a partir de uma visão dorsal. &lt;img alt = "Figura 4" src = "files/ftp_upload/2958/2958fig4.jpg /" /&gt; Figura 4. Micro-CT digitalização de imagens do cérebro do rato inteiro mesmo adulto mostrado na Figura 3 a partir de uma visão dorsal. <img alt="Figura 5" src="/files/ftp_upload/2958/2958fig5.jpg"> Figura 5. Aplicação do método de fundição vascular para detectar uma malformação arteriovenosa cerebral. A) Micro-CT scan do cérebro vascular casted mostra região de alargada, irregular AVM-como vasos no hemisfério direito do ponto de vista ventral. Imagem ampliada da região (caixa branca) é mostrado à direita. B) O mesmo embarcações irregulares visualizados sob microscópio de campo claro com ampliação de 50x. Barra de escala 50 mm.

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Procedimentos experimentais para a utilização de animais de laboratório foram aprovados pelo Institutional Animal Care e do Comitê Use da Universidade da Califórnia, San Francisco (UCSF).

Nós relatamos aqui um método para fundição de cerebrovasculature rato adulto que pode ser trabalhada com diversas modalidades. Aplicação deste método para a BAVM modelo de doença permite a análise 3D dos vasos irregular. Potenciais futuros estudos incluem quantificação de micro-TC, a análise histológica do tecido, e diagnóstico de progressão da doença vascular. Problemas comuns encontrados e Sugestões Perfusão completa da vasculatura cerebral nem sempre é alcançado. Ter pressão suficiente para alcançar os vasos sanguíneos sem ruptura distal do átrio esquerdo ou aorta é um desafio. Para superar isso, aplicar uma pressão consistente de aproximadamente 100mmHg. Também, ajustar a posição da agulha para assegurar a vazão adequada de fundição agente para a aorta. É importante que as artérias carótidas não são restritas para que o agente de elenco pode atingir os vasos do cérebro. Procedimentos críticos que se correlacionam com pequenos vasos melhorou porfusão são: (1) remoção adequada do sangue dos vasos; (2) filtração do agente de elenco, e (3) a colocação da agulha durante a injeção do casting. Cuidados devem ser tomados para evitar a injecção de fundição agente para o átrio esquerdo eo pulmão. Outros investigadores com sucesso perfundidos mouse de 3 e 4 cerebrovasculature rato sem o uso de procedimentos adicionais. Análise manual dos vasos perfundidos Microfil contracorados com hemotoxylin mostrou 93% dos navios de perfusão lumen 5. Sempre descartar ou completamente limpa qualquer ferramenta que entra em contato com o agente de elenco como ele irá polimerizar rapidamente, e ferramentas não podem ser usados ​​para diversos assuntos. Clarificação do tecido ao redor do mouse cérebro pode ser um desafio. Após imersão em salicilato de metila, o tecido ainda pode aparecer opaco, tornando difícil de imagem navio. Assegurar a desidratação adequada e esclarecimento deve resolver este problema. Colocação de tecido cerebral em um roqueiro durante álcool e metil salicylate tratamento pode melhorar a clarificação dos tecidos. Desvantagens da técnica As limitações dessa técnica incluem: (1) é necessário para injetar a solução de agente de elenco imediatamente após a mistura-lo como ele vai engrossar rapidamente após o catalisador é adicionado; (2) o agente de elenco enche vasos de condutância grande facilidade, mas não confiável encher vasos menores, tais como arteríolas (vasos de resistência) e capilares (vasos nutritivos) e (3) não é o melhor contraste radiopaco para micro-TC, embora alguns grupos preferem Microfil para micro-TC 1,6. No entanto, seguindo as sugestões propostas anteriormente, incluindo a colocação de agulha apropriada, a posição do navio e pressão de perfusão, casting completa de navios menores podem ser alcançados. A adaptabilidade a várias ferramentas de análise faz deste agente um valioso instrumento para analisar a estrutura cerebral, incluindo a circulação arterial e venosa, com váriasperspectivas. Aplicações da Técnica O benefício deste método é seu potencial de aplicação ampla. O elenco preenche todos os navios, incluindo artérias, veias, capilares e de todos os tecidos dentro do corpo, por isso as estruturas vasculares em vários órgãos de várias espécies podem ser analisados. Anteriormente, outros grupos têm utilizado este perfusão para grandes e pequenos 7 8 navios em humanos, macacos, 9 de ovelhas 10, ratos 4,11,12 e mouse 3,13. Vamos agora mostrar evidências do uso desta técnica na análise da estrutura de microvasos no cérebro do rato, em estados sãos e doentes 2. Além disso, existem soluções Microfil com viscosidades diferentes disponíveis para perfundir vasos de diferentes tamanhos e cores diferentes para melhorar a visualização dos vasos em vários órgãos. Por exemplo, o vermelho pode ser facilmente visualizado no parênquima cerebral pálido e amarelo contrasta bem com avermelho escuro miocárdio. Além disso, como o material é radiopaco, vasculatura podem ser visualizados com micro-tomografia computadorizada para obter uma imagem 3D giratório. O tecido também pode ser usado para cortes em parafina e análise histológica depois de ser fotografada. Conclusão Demonstramos aqui um protocolo para fazer um molde vascular dos vasos sanguíneos do cérebro do rato adulto, que podem ser adaptados usando uma variedade de técnicas de análise para estudar a estrutura morfológica do cerebrovasculature. Nós também fornecemos evidências para a aplicação deste método para um modelo do estado de doença BAVM, representado por alargada, as embarcações de forma irregular que o sangue de shunt arterial para as circulações venosa. Há uma variedade de métodos de fundição disponíveis vascular. O protocolo simples que oferecemos aqui para um elenco vascular pode ser usado como uma ferramenta para examinar a vascularização do cérebro do rato adulto usando diversas modalidades de imagem.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Notas </td></tr><tr><td> Microfil </td><td> FlowTech, Inc. </td><td> MV130 </td><td> 4 meses a vida de prateleira </td></tr><tr><td> Salicilato de metila </td><td> Fisher Scientific </td><td> O3695-500 </td><td> para esclarecer o tecido </td></tr></tbody></table>

fundição vascular cerebral do rato adulto for imaging 3d e análise morfológica

Cerebrovascular Casting of the Adult Mouse for 3D Imaging and Morphological Analysis

Vasculares imagem é crucial para o diagnóstico clínico e tratamento das doenças cerebrovasculares, como malformações arteriovenosas cerebrais (BAVMs). Modelos de animais são necessários para estudar as terapias etiopatogenia e potencial de doenças cerebrovasculares. Imagem da vasculatura em animais de grande porte é relativamente fácil. Entretanto, os métodos de imagem navio desenvolvimento de modelos murinos doença cérebro é desejável devido ao custo e disponibilidade de linhas geneticamente modificados mouse. Imagem da árvore vascular cerebral murina é um desafio. Em humanos e animais maiores, o padrão-ouro para avaliar a angioarquitetura no macrovascular (condutância) nível é x-ray cateter baseado em contraste angiografia, um método não é adequado para pequenos roedores. Neste artigo, apresentamos um método de fundição cerebrovascular que produz um esqueleto duráveis ​​de todo o leito vascular, incluindo artérias, veias e capilares que podem ser analisados ​​usando d muitosmodalidades IFERENTES. Fundição completo dos microvasos da cerebrovasculature mouse pode ser difícil, no entanto, estes desafios são abordadas neste protocolo passo a passo. Por meio de perfusão intracardíaca do material de fundição vascular, todos os vasos do corpo são fundidos. O cérebro pode então ser removido e clarificado com o salicilato de metila solvente orgânico. Três dimensional imagem dos vasos sanguíneos do cérebro pode ser visualizado de forma simples e barata com qualquer microscópio de campo claro convencional ou microscópio de dissecação. O cerebrovasculature casted também pode ser trabalhada e quantificados utilizando micro-tomografia computadorizada (micro-CT) 1. Além disso, depois de ser fotografada, o cérebro fundido pode ser incluído em parafina para análise histológica. O benefício deste método de fundição vascular, em comparação com outras técnicas é a sua ampla adaptação a diversas ferramentas analíticas, incluindo brightfield análise microscópica, tomografia computadorizada, devido à características radiopacoapanágio do material, bem como a análise histológica e imuno-histoquímico. Este uso eficiente de tecido pode salvar utilização de animais e reduzir os custos. Recentemente, demonstrou aplicação deste método para visualizar os vasos sanguíneos irregulares em um modelo do rato de BAVM adulto em um nível microscópico 2, e fornecer imagens adicionais dos vasos malformados fotografada por micro-tomografia computadorizada. Embora este método tem desvantagens e não pode ser ideal para todos os tipos de análises, é uma técnica simples e prática que pode ser facilmente aprendido e amplamente aplicado para fundição vascular dos vasos sanguíneos em todo o corpo.

Neste artigo, apresentamos uma técnica simples e prática para a fundição cerebrovascular que é fácil de executar e pode ser utilizado para a imagem da árvore vascular do cérebro do rato adulto.

Fundição vascular cerebral do rato adulto for Imaging 3D e Análise morfológica

A imagem vascular é fundamental no diagnóstico clínico e no manejo de doenças cerebrovasculares, tais como as malformações arteriovenosas cerebrais (MAVCs).

O objetivo geral deste procedimento é visualizar a vasculatura cerebral do camundongo adulto em 3D. Isso é realizado primeiramente abrindo a cavidade torácica e removendo todo o sangue da vasculatura por meio de perfusão oral com PBS contendo heparina. Após a perfusão, um agente de moldagem é injetado no ventrículo esquerdo para perfundir todo o sistema circulatório. O cérebro perfundido é então removido e fixado em paraformaldeído.O passo final do procedimento é desidratar e clarificar o tecido cerebral com etanol e salicilato de metila. Em última análise, podem-se obter resultados que mostram um cérebro transparente de camundongo, cuja árvore vascular pode ser visualizada ao microscópio de campo claro ou estereomicroscópio, bem como por meio de tomografia computadorizada micro-CT. Olá, meu nome é Spen Walker, da Universidade da Califórnia em São Francisco.Hoje vamos produzir uma moldagem vascular do cérebro de camundongo adulto. As principais vantagens desta técnica em relação aos métodos existentes, como a angiografia, são que ela pode ser aplicada em animais pequenos, tais como o camundongo. Não há necessidade de material radioativo, e é um procedimento relativamente simples de realizar.Isso permitiu sua adaptação a diversas ferramentas analíticas, incluindo microscopia de campo claro, análise microscópica, varredura por tomografia computadorizada, devido à característica radiopaca do material, bem como análises histológicas e imunohistoquímicas. Ok, vamos começar. Anestesie o camundongo por injeção intraperitoneal de quetamina e xilazina diluídas em solução salina e confirme a anestesia completa por meio do aperto na pata.Uma vez confirmada a anestesia, use uma tesoura para fazer uma incisão no tórax logo abaixo do processo xifoide. Em seguida, corte o diafragma e depois suba entre os segmentos dorsal e ventral da caixa torácica. Para expor a cavidade torácica, levante o esterno e a parede torácica adjacente e fixe-os com uma hemostática para expor o saco pericárdico.Em seguida, abra o saco pericárdico com pinça, se necessário, para expor o coração. Com a bomba de perfusão ajustada em 100 milímetros de mercúrio, comece a perfundir PBS acrescido de cinco unidades por mililitro de heparina aquecido a 37 graus Celsius. Insira a agulha romba de calibre 22 conectada à saída da bomba no ventrículo esquerdo próximo ao ápice do coração. Corte imediatamente.Abra o átrio direito para permitir a saída do sangue sistêmico e continue a lavagem até que o sangue seja removido da circulação. Primeiro, prepare uma solução de agente de moldagem misturando cinco mililitros do diluente com quatro mililitros do composto filtrado. Em seguida, adicione 450 microlitros do agente de cura e certifique-se de utilizar a solução de agente de moldagem dentro de 20 minutos.Misture a solução do agente de moldagem imediatamente antes do uso. Para garantir a viscosidade adequada, aspire a solução do agente de moldagem em uma seringa de 10 mililitros. Acople uma agulha romba de calibre 20 à seringa e preencha a agulha com a solução.Insira a agulha no ventrículo esquerdo através do mesmo orifício utilizado para lavar o sangue e, em seguida, fixe a agulha no lugar com uma pinça hemostática. Injete manualmente a solução do agente de moldagem lentamente no ventrículo esquerdo a aproximadamente três mililitros por minuto, pois pressão excessiva pode levar a fluxo incorreto ou possível ruptura dos vasos durante a injeção. Observe sinais de perfusão bem-sucedida, incluindo a visualização do agente de moldagem na vasculatura do intestino e do fígado, descoloração nas extremidades distais e descoloração no nariz e na língua. Reajuste a agulha, se necessário, para obter uma perfusão adequada.Remova o cérebro e coloque em paraformaldeído 4% durante a noite a quatro graus Celsius. Em seguida, desidrate o cérebro ao longo de sete dias colocando-o diretamente em etanol de concentração crescente à temperatura ambiente, começando no primeiro dia com etanol 25%. Uma vez desidratado, clarifique o tecido cerebral ao redor dos vasos sanguíneos imergindo o cérebro perfundido em salicilato de metila por dois dias à temperatura ambiente. Após dois dias, a vasculatura de todo o cérebro clarificado pode ser visualizada sem corte, mediante imersão em salicilato de metila, usando microscopia de campo claro, bem como microscopia estereoscópica ou tomografia computadorizada micro-CT. Usando microscopia de campo claro, a vasculatura pode ser observada em diferentes planos focais sem corte do cérebro, assim como vasos microscópicos individuais em maior aumento.Mostrado aqui no painel inferior. Sob um microscópio estereoscópico, pode-se observar toda a estrutura vascular cerebral em um único plano focal, permitindo uma melhor visualização de sua estrutura tridimensional. Esta imagem mostra a morfologia dos grandes vasos e a vasculatura completa do cérebro, mas não apresenta os detalhes evidenciados nas imagens obtidas com microscopia de campo claro.A microtomografia computadorizada permite a visualização tridimensional da vasculatura e possibilita a construção de modelos 3D rotacionáveis. Para visualizar a vasculatura, aqui é mostrada uma estrutura vascular cerebral anormal detectada por microtomografia computadorizada, correlacionando-se com uma imagem de microscopia de campo claro da mesma malformação vascular. Em conjunto, esses dados demonstram que a mesma amostra pode ser analisada utilizando múltiplas ferramentas de imagem após o molde da vasculatura.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como moldar os vasos sanguíneos do encéfalo de camundongo adulto utilizando solução Microfil. Este procedimento inclui a remoção do sangue da vasculatura, injeção intraventricular da solução Microfil, coleta e processamento do encéfalo de camundongo adulto e obtenção de imagens da vasculatura cerebrovascular utilizando microscopia de campo claro. O objetivo geral deste procedimento é visualizar a vasculatura cerebral do encéfalo de camundongo adulto em três dimensões.

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JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Nós apresentar um método para formar uma janela de imagem no crânio do rato que se estende por milímetro e é estável durante meses sem inflamação do cérebro. Este método é bem adequado para estudos longitudinais de fluxo de sangue, a dinâmica celular, e as células / estrutura vascular utilizando dois fotões microscopia.

A polido e reforçado Janela afinado crânio para longo prazo de imagens do cérebro de camundongo

Este vídeo apresenta um procedimento cirúrgico para implantar janela craniana em um modelo de camundongo para acesso óptico estável a diferentes regiões do cérebro.

Implantação de janela de imagem craniana em modelo de camundongo: um procedimento cirúrgico para implantar lamínula à base de vidro para acesso óptico estável a regiões do cérebro murino

Fonte: Choi, J. P. et al. Indução e micro-CT de malformações cavernosas cerebrais em modelo de camundongo. J. Vis. exp. ( 2017)Este vídeo demonstra o uso de imagens de micro-TC para visualizar lesões de malformação cavernosa cerebral (CCM) em um cérebro de camundongo. Ele detalha as etapas de preparação da amostra, imagem e reconstrução de imagem 3D para avaliar a densidade e a localização das lesões de CCM no tecido cerebral.

Imagem de micro-tomografia computadorizada com contraste de lesões de malformação cavernosa cerebral em um cérebro de camundongo

Usando exames de ressonância magnética (humana), software de imagem 3D e análise imuno-histológica, documentamos alterações nos ventrículos laterais do cérebro. O mapeamento longitudinal 3D das alterações do volume do ventrículo lateral e a caracterização das alterações celulares periventriculares que ocorrem no cérebro humano devido ao envelhecimento ou doença são então modelados em camundongos.

Modelagem 3D do lateral ventrículos e histológica Caracterização do Tecido Periventricular em humanos e mouse

O uso de vários ângulos para cortar o cérebro do rato filhote, podemos melhorar em cima de uma fatia cerebral aguda anteriormente descrito que captura as conexões entre a maioria dos principais mesencéfalo e prosencéfalo estruturas auditivas.

A modificação de um Colliculo-tálamo-cortical do cérebro do rato Fatia, Incorporando a impressão 3-D da Câmara Components and Imaging Optical Multi-escala

Este manuscrito descreve um procedimento para controlar a remodelação do cerebrovasculature durante amyloid acúmulo de placa in vivo utilizando microscopia de dois fótons longitudinal. Uma preparação crânio-diluídos permite a visualização de corantes fluorescentes para avaliar a progressão do dano vascular cerebral num modelo de rato da doença de Alzheimer.

Longitudinal<em&gt; In Vivo</em&gt; Imagens do Cerebrovasculature: Relevância para doenças do SNC

Este protocolo demonstra a indução da doença malformação cavernosa cerebral em um modelo do rato e usa contraste aprimorado micro computadorizada para medir carga de lesão. Esse método aumenta o valor dos modelos de rato estabelecida para estudar a base molecular e terapias potenciais para malformação cavernosa cerebral e outras doenças cerebrovasculares.

Indução e Micro-CT Imaging de malformações cavernosas cerebrais no modelo de Mouse

O objetivo desta técnica é a visualização ex vivo de redes arteriais pulmonares de camundongos pós-natais e adultos precoces através da inflação pulmonar e injeção de um composto radio-opaco à base de polímero através da artéria pulmonar. Também são discutidas possíveis aplicações para tecidos fundidos.

Fundição Vascular de Pulmões de Camundongos Adultos e Precoces para Imagem Micro-CT

Este estudo descreve os passos para a obtenção de imagens de alta resolução de cérebros neonatais de camundongos combinando microtomografia computadorizada (micro-TC) e um agente de contraste em amostras ex vivo . Descrevemos análises morfométricas básicas para quantificar o tamanho e a forma do cérebro nessas imagens.

Micro-TC e Análise Morfométrica de Cérebros Neonatais de Camundongos

O método da agulha de estenose bilateral assimétrica da artéria carótida comum é proposto para criar um modelo de camundongo para comprometimento cognitivo vascular e demência. Isso resulta em resultados de longo prazo em comparação com modelos previamente estabelecidos e é compatível com ressonância magnética ao vivo. A representação visual demonstrando o procedimento fornece orientação para o domínio da cirurgia.

Um modelo de camundongo para comprometimento cognitivo vascular e demência baseado em estenose bilateral assimétrica da artéria carótida comum guiada por agulha

A microscopia intravital permite o estudo de processos biológicos dinâmicos, como regeneração tecidual e desenvolvimento tumoral. A medula óssea da calvária, um tecido altamente dinâmico, oferece informações sobre hematopoiese e função vascular. O uso de um implante de fixação de cabeça impresso em 3D biocompatível permite imagens longitudinais repetitivas, aprimorando nossa compreensão da dinâmica do tecido e do microambiente tumoral.

Imagem longitudinal intravital da dinâmica vascular na medula óssea da calvária

Aprenda a técnica de fundição vascular cerebral em camundongos adultos para visualização 3D da árvore vascular. Este método utiliza perfusão intracardíaca com agente de moldagem e preparação tecidual para análise morfológica detalhada.

Fundição vascular cerebral do rato adulto for Imaging 3D e Análise morfológica

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