Ensaio de spin down de agarose: uma técnica para incorporar organoides para análise histológica

Culturas organoides 3D de células cancerígenas recapitulam muitas características fisiopatológicas de cânceres humanos. Assim, essas culturas in vitro formam um excelente modelo para a pesquisa do câncer.

Para processar esses organoides, comece com uma cultura de organoides 3D pré-formados cultivados em uma matriz de membrana basal adequada. Adicione um meio de recuperação celular desejado e incube. O meio facilita a despolimerização do gel da matriz, liberando os organoides 3D na solução.

Centrifugue esta mistura para peletizar os organoides. A mídia de recuperação que contém os componentes da matriz permanece no sobrenadante. Descarte o sobrenadante. Em seguida, adicione solução de paraformaldeído ao pellet organoide. O produto químico entra nas células organoides e se liga aos aminoácidos, causando reticulação de proteínas e fixação da amostra. Esta etapa é vital para qualquer aplicação histológica a jusante.

Pelotize os organoides para separar e remover o sobrenadante contendo paraformaldeído. Adicione agarose derretida quente aos organoides. Use uma agulha para destacar e dispersar os organoides peletizados na agarose líquida. Deixe a agarose solidificar e incorporar os organo