Extração de lisado de proteína: uma técnica para lisar organoides para coletar proteínas celulares

O lisado celular, ou o fluido que contém o conteúdo celular lisado, encontra aplicação em processos a jusante, como extrações e análises de proteínas. O estudo dessas frações revela informações sobre as características e funções das células.

Para preparar lisados de proteínas organoides, comece com uma cultura de organoides cultivados em uma matriz de membrana basal desejada. Remova os meios de cultura gastos do prato. Adicione meios quentes contendo proteases sobre a matriz. Pipet repetidamente para desalojar a matriz do prato.

Incube a mistura. As enzimas proteolíticas no meio degradam a matriz e liberam os organoides na solução. Centrifugue a amostra para separar os organoides do sobrenadante contendo enzimas.

Ressuspenda o pellet organoide em um tampão de lise de proteína adequado. Incubar a amostra. Os detergentes no tampão rompem as membranas celulares dos organoides, liberando conteúdo intracelular na solução. Ao mesmo tempo, os inibidores de proteínas no tampão inativam quaisquer enzimas protease e fosfatase liberadas, impedindo a degradação de suas proteínas substratos.

Além disso, sonice a mistura para romper completamente as células. O envelope nuclear se rompe e libera