Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 4:27 min. • April 30th, 2023
Os organoides da próstata constituem principalmente uma camada externa de células epiteliais basais e camadas internas de células epiteliais luminais dispostas em torno de um lúmen central.
A imagem de montagem total permite o estudo de organoides 3D intactos, mantendo sua morfologia e heterogeneidade. Para iniciar a coloração, trate os organoides com um fixador adequado para travar seus componentes celulares no lugar, preservando-os. Lave a amostra para remover o excesso de fixadores.
Incube com um coquetel de solução de bloqueio e corante de coloração de DNA. As proteínas na solução de bloqueio ligam-se passivamente a locais não específicos das células e reduzem qualquer coloração de fundo. Ao mesmo tempo, o corante de coloração de DNA mancha os núcleos das células.
Adicione dois conjuntos de anticorpos primários direcionados a antígenos específicos expressos pelas duas populações de células constituintes. Incube com dois anticorpos secundários conjugados com corante fluorescente diferentes que se ligam aos anticorpos primários. Lave a amostra para remover quaisquer anticorpos não ligados.
Mergulhe os organoides corados sequencialmente em concentrações crescentes de soluções de a
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