Injeção intra-prostática de células cancerígenas: uma técnica para entregar células cancerígenas para estabelecer o modelo ortotópico de camundongo com câncer de próstata

A injeção intra-prostática ortotópica de tumor entrega células tumorais correspondentes ao histotipo do tecido prostático diretamente na próstata do animal receptor.

Para começar, prepare um camundongo macho anestesiado na posição supina. Faça uma incisão abdominal na linha média e disseque a musculatura interna para expor a cavidade abdominal. Localize um dos lobos anteriores da próstata. Esses lobos da próstata estão ligados à curvatura menor das vesículas seminais e ficam próximos à bexiga urinária.

Agora, injete uma suspensão gelada de células de câncer de próstata misturadas com a matriz de membrana basal desejada no longo eixo do lobo anterior da próstata. Garanta a entrega completa da suspensão celular e retraia suavemente a agulha. Permita que a matriz solidifique e incorpore as células dentro.

Posteriormente, coloque o lobo da próstata junto com a vesícula seminal de volta na cavidade abdominal. Suturar a incisão cirúrgica. Permita que o mouse se recupere. Verifique o camundongo semanalmente para observar o crescimento de tumores ortotópicos no lobo anterior da próstata.

Depois de confirmar a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé, aplique pomada nos olhos do camundongo e raspe todo o pelo do abdômen do animal. Esterilize a pele exposta com três rodadas de esfoliação cirúrgica usando compressas estéreis não aderentes, seguidas de lenços umedecidos com álcool estéreis. Quando a pele estiver seca, coloque o camundongo em decúbito dorsal sobre uma superfície limpa sobre uma almofada de aquecimento diretamente sob a objetiva de um microscópio cirúrgico limpo e cubra o animal com uma cortina estéril com um pequeno orifício cortado sobre o abdômen.

Faça uma incisão de 1 centímetro na pele externa e na musculatura abdominal interna ao longo da linha média do abdômen superior ao pênis e às glândulas prepuciais. Localize uma das vesículas seminais bilaterais e os lobos anteriores da próstata anexados que são tipicamente posteriores, laterais e ligeiramente superiores à bexiga. Peça a um assistente para misturar a solução de células cancerígenas de matrigel Myc-CaP com pipetagem suave e aspirar lentamente 30 microlitros de células em uma agulha de calibre 28 conectada a uma seringa de 50 microlitros.

Em seguida, usando uma pinça de tecido de Graefe, levante suavemente a ponta de uma vesícula seminal para criar tensão no tecido sem perfurar a vesícula e insira cuidadosamente o chanfro da agulha paralelo ao eixo longo do lobo anterior da próstata. Injete lentamente todo o volume de células no lobo, seguido de retração lenta da agulha para evitar vazamentos.

Uma injeção bem-sucedida será aparente por um ingurgitamento do lobo interior da próstata. Com cuidado e firmeza, mantenha a vesícula seminal e o lobo da próstata injetado fora do camundongo por aproximadamente 30 segundos para permitir que o matrigel se solidifique parcialmente dentro do lobo. Use um aplicador estéril com ponta de poliéster para coletar qualquer vazamento de solução celular no abdômen para evitar o desenvolvimento de tumores não ortotópicos.

Uma injeção intraprostática precisa é fundamental para o desenvolvimento do tumor ortotópico. Tomar cuidado extra para evitar perfurar a vesícula seminal, injetar lentamente a suspensão de células cancerígenas e coletar qualquer vazamento de células aumentará o sucesso desse procedimento.

Agora, retorne suavemente a vesícula seminal e o lobo injetado ao abdômen sem pressionar o lobo e substitua os tecidos externalizados. Usando suturas de agulha de corte reverso absorvíveis vicryl 5-0, feche a musculatura abdominal interna com pontos contínuos, seguido de fechamento da pele abdominal externa com pontos interrompidos usando suturas de agulha de corte reverso não absorvíveis de monofilamento de nylon 4-0.

Em seguida, administre analgesia pós-operatória e coloque o camundongo em uma gaiola sem cama a meio caminho em uma almofada de aquecimento com monitoramento até a recuperação total.

• Prostate Cancer Model - A lab representation to study the progression & treatment of prostate cancer.
• Intraprostatic Injection - Technique of injecting medication or solution directly into the prostate.
• Matrigel - A gelatinous protein matrix used in tumor cell research.
• Orthotopic Tumor Model - Study model wherein tumor cells are implanted in their original organ.
• Seminal Vesicles - Male reproductive glands located near the prostate, integral to the injection procedure.

• Introduce Prostate Cancer Model – Biological method to examine prostate cancer (e.g., intraprostatic injection).
• Key Concepts – Involve steps like shaving, sterilizing, incising and suturing (e.g., prostate biopsy procedure video).
• Underlying Mechanisms – Seminal vesicles and anterior prostate lobes are involved (e.g., prostate cancer real images).
• Connect to Experiment – Demonstrate how injections ensure successful tumor implantation within prostate.

• What is intraprostatic injection used for in a prostate cancer model?
• How is the matrigel cancer cell solution involved in the procedure?
• Why is careful handling of seminal vesicles and prostate lobes crucial in this experiment?

• Practical Applications – Used in surgical training and cancer treatment research (e.g., prostate cancer injection).
• Industry Impact – Benefits medical industries, particularly oncology and urology (e.g., injection for prostate cancer).
• Societal Importance – Advancement in prostate cancer treatment techniques (e.g., injection prostate).
• Link to Scientific Advancements – Continuous improvement of prostate cancer models for research.