Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 4:50 min. • April 30th, 2023
A fosforilação de resíduos de aminoácidos específicos, como a tirosina, gera fosfopeptídeos que desempenham papéis críticos na regulação de várias vias de sinalização celular. Estudá-los permite a identificação de potenciais biomarcadores para a terapia do câncer.
Para isolar os fosfopeptídeos, comece com um pó liofilizado de digeridos peptídicos purificados extraídos do tecido cancerígeno. Ressuspenda o pó em um tampão adequado para preparar uma suspensão peptídica uniforme. Mantenha um pH neutro para garantir a estabilidade do peptídeo.
Preparar uma pasta constituída por esferas de hidrogel conjugadas com anticorpos antifosfopeptídeos específicos no tampão pretendido. Adicione a pasta de esferas à suspensão de peptídeos. Os anticorpos imobilizados nas esferas reconhecem e se ligam aos seus resíduos específicos de aminoácidos fosforilados dentro dos fosfopeptídeos, formando complexos.
Centrifugar a mistura para recolher os complexos fosfopeptídeo-grânulos no sedimento. Remover o sobrenadante que contém péptidos não ligados ou fosfopeptídeos não específicos. Adicione um tampão de eluição de pH baixo adequado aos complexos e incube. O baixo pH enfraquece a interação entre os resíduo
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos