Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 3:32 min. • April 30th, 2023
Para um carcinoma de células uroteliais derivado do paciente ou geração de modelo de camundongo UCC, um camundongo imunocomprometido é inoculado com células UCC humanas para estudar a progressão e metástase do câncer.
Para iniciar o xenoenxerto, pegue um camundongo fêmea anestesiado imunocomprometido. Raspe a parte inferior das costas do mouse para expor sua região pélvica. Agora, coloque o mouse em decúbito dorsal com a pele exposta em contato com uma almofada dispersiva que serve como eletrodo de aterramento para completar o circuito durante a estimulação elétrica.
Em seguida, pegue um angiocateter, um tubo oco fino, preso a um fio-guia. Lubrifique a superfície do cateter e insira-o na uretra do camundongo para acessar sua bexiga. Coloque um eletrodo ativo no fio-guia para estimular a parede da bexiga. Este procedimento ajuda a romper a camada de mucopolissacarídeo, uma barreira protetora da mucosa da bexiga, e auxilia no subsequente enxerto de células tumorais.
Agora, remova suavemente o conjunto angiocateter-fio-guia da uretra. Pegue um segundo angiocateter conectado a uma seringa contendo a suspensão de células UCC e insira-o na uretra do camundongo. Injete as células UCC na bexiga do camundongo. As células cancerígenas interagem com a mucosa da bexiga para formar um tumor que pode eventualmente se espalhar para outros tecidos e órgãos.
Para preparar o animal para a injeção de células UCC, use creme depilatório para raspar a parte inferior das costas de um camundongo NOD / SCID fêmea de 6 a 8 semanas de idade. Para administrar células UCC na bexiga, primeiro, configure uma máquina de eletrocautério monopolar com uma potência de 4 watts. Depois de anestesiar o camundongo, coloque-o em decúbito dorsal com o focinho em um cone nasal de isoflurano e as costas nuas firmemente aterradas em um eletrodo dispersivo.
Lubrifique um angiocateter de calibre 24 com geléia lubrificante e, em seguida, insira o angiocateter suavemente, mas com firmeza, através da uretra do camundongo. Se o cateter dobrar na entrada, insira o fio-guia até a metade do cateter para fornecer estabilidade. Em seguida, insira totalmente o fio-guia reto de núcleo fixo de 0,64 milímetro 1 milímetro após a extremidade do angiocateter.
Segure o pino monopolar no fio-guia por 1 segundo, permitindo irritação elétrica da mucosa da bexiga. Conecte um angiocateter estéril fresco à seringa Luer-Lok de 1 mililitro e retire até 200 microlitros de células UCC. Remova o fio-guia e o angiocateter da uretra e, em seguida, insira o angiocateter com uma seringa de células presa a ele.
Injete 50 microlitros das células na bexiga do camundongo e, para permitir que as células adiram à parede da bexiga, aguarde alguns segundos antes de remover o angiocateter. Por fim, remova o mouse do cone do nariz de isoflurano e da almofada de aterramento e observe-o por 1 hora após o procedimento quanto a sinais de angústia.