Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Pesquisa sobre o Câncer
0 visualizações • 3:30 min. • February 22nd, 2023
Os scaffolds de órgãos inteiros descelularizados consistem em uma matriz extracelular tridimensional com uma rede vascular intacta. Esses andaimes retêm a composição específica do tecido e a integridade funcional e desempenham um papel essencial na bioengenharia de órgãos.
Para preparar um rim de rato descelularizado, primeiro obtenha um rim de rato recém-colhido junto com sua principal vasculatura arterial e venosa - a aorta abdominal e a veia cava inferior. Amarre o ureter, as pequenas bifurcações arteriais e venosas para evitar vazamento de líquido durante o processo de perfusão subsequente.
Coloque o rim em um tampão adequado para garantir a hidratação do órgão. Insira cateteres de tamanho apropriado nas principais vasculaturas e prenda-os. Conecte o cateter a uma bomba peristáltica. Perfunda o rim com um tampão contendo anticoagulante a uma taxa de fluxo e pressão apropriadas pela duração desejada.
Esta etapa ajuda a remover eficientemente o sangue do órgão através do fluxo venoso. Troque o perfusato por um surfactante não iônico para permeabilizar as membranas celulares. Em seguida, perfundir o órgão com um surfactante aniônico para solubilizar efetivamente as membranas celular e nuclear, resultando em lise celular e liberação de conteúdo intracelular.
Os componentes celulares liberados e os detritos fluem para fora do rim, tornando-o gradualmente translúcido. Injete o rim descelularizado com um tampão adequado contendo antibióticos e anticoagulantes para remover o surfactante residual e quaisquer detritos remanescentes do órgão. Os antibióticos previnem a probabilidade de crescimento bacteriano dentro do órgão descelularizado.
Colha o rim esquerdo com a aorta abdominal e a veia cava inferior. Ligue o ureter, a aorta torácica, a veia cava superior e os ramos da aorta abdominal. Mantenha o órgão hidratado em DPBS em uma placa de Petri de 10 centímetros. Canule a aorta abdominal e a veia cava inferior com um cateter de calibre 23.
Para remover o sangue residual, conecte a cânula a uma bomba peristáltica e lave o órgão com 500 mililitros de DPBS e 16 unidades por mililitro de heparina por 90 minutos a 5 rpm e 37 graus Celsius. Para descelularizar o rim, perfunda-o com Triton X-100 a 1% por 3 horas e depois com solução SDS a 0,75% por 6 horas a uma pressão constante de 40 mililitros de mercúrio.
Para remover o SDS residual, perfundir a amostra com penicilina a 1% em água destilada por 18 horas e, em seguida, com DPBS estéril e 16 unidades por mililitro de heparina por 90 minutos.