Coloração de DNA extracelular: um método para identificar DNA extracelular em seções de tecido FFPE

Uma célula moribunda libera uma fração de DNA fora da célula chamada DNA extracelular. Para corar o DNA extracelular, comece fazendo uma seção de tecido embebida em parafina, ou FFPE, fixada em formalina em uma lâmina de vidro. Aqueça a lâmina de vidro pela duração desejada. Isso facilita a fixação do tecido na superfície da lâmina e amolece a parafina circundante.

Mergulhe a lâmina no líquido de desparafinização para dissolver completamente a camada de parafina ao redor do tecido. Em seguida, mergulhe a lâmina em concentrações decrescentes de etanol para reidratar o tecido desparafinizado. Após a reidratação, mergulhe a lâmina em solução de recuperação de antígeno em ebulição. Este tratamento desmascara os epítopos que foram alterados durante o processo de fixação.

Cubra a lâmina com anticorpos primários e permita que eles se liguem a epítopos específicos não mascarados presentes na célula. Em seguida, adicione anticorpos secundários marcados com fluorescência, que se ligam aos anticorpos primários. Mergulhe a lâmina na solução Sudan Black para reduzir a autofluorescência de fundo.

Por fim, coloque uma gota de meio de montagem suplementado com DAPI sobre a seção de tecido e sele-a