Isolamento de glomérulos: uma técnica para obter glomérulos intactos do rim murino

Nos rins dos vertebrados, os néfrons consistem em múltiplos glomérulos - uma densa rede de vasos sanguíneos - que desempenham um papel primordial na filtração de resíduos do corpo.

Para isolar os glomérulos, comece tomando um rim de camundongo recém-dissecado. Use uma pinça para retirar a cápsula renal do rim e coloque o rim limpo em uma nova placa de cultura. Agora, posicione o prato sobre o gelo para evitar a degradação renal. Pique o rim em pedaços pequenos.

Em seguida, ressuspenda os pedaços de rim picados em uma solução tampão adequada. Filtrar a suspensão de tecido através de um filtro de malha de grandes dimensões e recolher o fluxo num prato fresco. Repita esta etapa mais algumas vezes, diminuindo progressivamente o tamanho da malha a cada vez, até que os glomérulos se dissociem dos fragmentos renais.

Por fim, lave o filtro com o meio de cultura desejado para coletar os glomérulos menores aprisionados enquanto os fragmentos renais permanecem no filtrado. Transfira os glomérulos para uma placa de fixação ultrabaixa. Visualize a placa usando um microscópio de luz invertida.

Com a ajuda de uma micropipeta, capture um único glomérulo e transfira-o para um poço fresco. Suplementar o poço com meios de cultura e utilizar o glomérulo isolado para uma análise mais aprofundada.

Depois de liberar os rins conforme descrito no manuscrito do texto, segure o rim com a pinça cirúrgica e use outro par de pinças para retirar as cápsulas renais. Depois disso, coloque os rins nos poços de uma placa de cultura de 6 poços, cada um contendo 2 mililitros de HBSS e coloque a placa de cultura no gelo.

Em seguida, transfira os rins para uma placa de Petri de 100 milímetros e use dois bisturis para picá-los em pequenos pedaços de aproximadamente 1 a 2 milímetros. Mantenha os pedaços de rim picados molhados com HBSS.

Em seguida, coloque os pedaços de rim em cima de uma peneira de metal de 300 micrômetros e pressione o rim através da peneira usando o êmbolo de uma seringa de 20 mililitros. Enxágue repetidamente a peneira com HBSS no meio e use uma pipeta sorológica para coletar o fluxo e transferi-lo para uma placa de Petri limpa.

Use um bisturi para raspar tudo o que resta no fundo da peneira e transfira-o para o homogeneizado renal coletado. Enxágue o homogeneizado renal através de uma peneira de 75 e 53 micrômetros com HBSS. Em seguida, lave as duas peneiras com HBSS para remover todas as estruturas menores.

Colete as estruturas renais e o material que permanece nas peneiras lavando a superfície superior de cada uma com DMEM suplementado com 20% de soro fetal de bezerro e transfira o material para os poços de uma microplaca de fixação ultrabaixa de 6 poços.

Traga a microplaca de fixação ultrabaixa para um microscópio de luz invertida e use uma pipeta de 20 microlitros para coletar glomérulos encapsulados e/ou descapsulados únicos.

• Glomeruli - Capillary networks within a kidney that help filter blood.
• Scalpels - A surgical knife used to make accurate and clean incisions.
• Renal Capsule - The membrane protecting and enclosing the kidney.
• HBSS - (Hank's Balanced Salt Solution) a buffer used in biological research.
• DMEM - (Dulbecco's Modified Eagle Medium) a nutritional medium for cell cultures.

• Introduce Glomeruli - They are capillary networks in kidneys (e.g., glomeruli).
• Key Concepts - Summarize function of scalpels in dissection (e.g., precision).
• Underlying Mechanisms - Detail the filtration process by glomeruli.
• Connect to Experiment - Brief rationale linking glomeruli to kidney treatment.

• [Question 1] What are glomeruli and their function in the kidney?
• [Question 2] What is the use of scalpels in renal treatment?
• [Question 3] How do glomeruli contribute to kidney health?

• Practical Applications - Use of scalpel for precision in surgery (e.g., medical surgery).
• Industry Impact - Healthcare, especially renal treatments (e.g., kidney disorders).
• Societal Importance - Improved public health via better kidney treatments (e.g., dialysis).
• Link to Scientific Advancements - Progress in renal therapies involving glomeruli.