Modelagem de tumor ortotópico de bexiga em modelo de camundongo: um procedimento para administração intravesical de células cancerígenas na bexiga murina

A instilação intravesical facilita a entrega de células cancerígenas na bexiga urinária de um animal receptor. Para começar, prepare um camundongo fêmea anestesiado em decúbito dorsal em uma almofada de aquecimento para regular a temperatura corporal. Esvazie a bexiga de urina.

Em seguida, monte um cateter conectado a uma seringa contendo solução de poli-L-lisina ou PLL. Lubrifique a ponta do cateter para garantir uma inserção uretral suave e obter acesso à bexiga. Após a inserção, injete lentamente a solução PLL na bexiga.

A entrega lenta de PLL previne o refluxo vesicoureteral - o refluxo da urina da bexiga para os ureteres e rins. Coloque uma rolha no cateter para evitar o fluxo de saída prematuro. As moléculas de PLL injetadas com carga positiva interagem e aderem ao revestimento de glicosaminoglicano com carga negativa na parede interna da bexiga.

Remova o cateter e esvazie a bexiga da solução de PLL não ligada e a urina. Usando outro conjunto cateter-seringa, injete lentamente uma suspensão de células cancerígenas resfriada na bexiga para evitar o refluxo vesicoureteral e a subsequente implantação celular nos rins. Fixe a rolha no cateter.

A carga superficial alterada da camada de glicosaminoglicanos aumenta sua interação eletrostática com as células cancerígenas, facilitando sua adesão. Remova o cateter e desocupe a bexiga de células cancerígenas não aderidas e urina. Com o tempo, as células cancerígenas implantadas na bexiga proliferam para estabelecer tumores primários.

Uma vez que um camundongo fêmea tenha sido anestesiado, forneça hidratação por uma injeção intraperitoneal da solução de Hartmann a 0,1 mililitros por 10 gramas de peso corporal. Repita isso a cada uma ou duas horas durante a anestesia.

Em seguida, aplique pomada oftálmica estéril em ambos os olhos. Reaplique conforme necessário. Em seguida, posicione o mouse em decúbito dorsal sobre toalhas de papel sobre uma almofada térmica para manter a temperatura corporal. Em seguida, prenda as patas traseiras com fita adesiva. Agora, aplique uma leve pressão na região abdominal inferior e colete a urina em um tubo de 1,5 mililitro.

Em seguida, carregue uma seringa de 1 mililitro com PLL estéril e conecte um cateter IV de calibre 24 com o estilete de agulha removido. Aplique lubrificante na ponta do cateter. Em seguida, insira o cateter na uretra e, usando uma pinça, guie-o até a bexiga. Pare quando sentir resistência. Em seguida, ejete lentamente 50 microlitros de PLL a uma taxa de 10 microlitros a cada 20 segundos para evitar o refluxo vesicoureteral.

Agora, deixe o cateter na bexiga por 20 minutos com uma rolha para evitar o fluxo. Após 20 minutos, remova o cateter e esvazie a bexiga de qualquer conteúdo pressionando suavemente a parte inferior do abdômen. Em seguida, usando uma seringa de 1 mililitro, lave qualquer conteúdo restante para fora do cateter.

Agora, misture bem as células MB49-PSA pipetando e carregue-as em uma seringa de 1 mililitro. Conecte o cateter e lubrifique-o como antes. Insira o cateter na bexiga como antes e comece a injetar as células usando uma ejeção gradual de 10 microlitros por 20 segundos. Em seguida, aguarde uma hora.

Após uma hora, remova o cateter e esvazie a bexiga de qualquer conteúdo. Em seguida, solte o mouse. Posicione-o em seu lado ventral e reviva-o com uma injeção de atipamezol. Agora, monitore o camundongo até que ele recupere a decúbito esternal e, em seguida, devolva-o à sua gaiola inicial.