Entrega de plasmídeos de DNA no urotélio da bexiga de camundongo: um procedimento baseado em eletroporação para entregar plasmídeos de DNA de forma eficiente em células uroteliais da bexiga murina para gerar modelos geneticamente modificados

Para começar, prepare um camundongo fêmea anestesiado na posição supina. Certifique-se de que a bexiga esteja completamente vazia. Através da abertura uretral, insira um cateter lubrificado. A lubrificação auxilia na passagem uretral suave para a entrada na bexiga.

Após o cateterismo, faça uma incisão abdominal e disseque a musculatura interna para expor a bexiga. Em seguida, pipete uma suspensão de plasmídeos de DNA misturada com um corante adequado na extremidade externa do cateter. Esses plasmídeos de DNA codificam um gene repórter fluorescente.

Conecte uma seringa ao cateter e empurre-a para entregar a solução plasmidial na bexiga. As moléculas de corante injetadas colorem a bexiga, confirmando a administração bem-sucedida da solução de plasmídeo. Remova o conjunto do cateter e aperte o orifício uretral externo para evitar que a solução plasmidial saia.

Agora, aperte a bexiga usando dois eletrodos conectados a um gerador de eletroporação. Aplique pulsos elétricos de voltagem apropriada por um período desejado na bexiga. A exposição do urotélio da bexiga, o revestimento mais interno da bexiga, aos campos elétricos aplicados resulta em poros temporários na membrana celular urotel