Isolamento de exossomos: uma técnica de ultracentrifugação baseada em densidade usando almofada de sacarose para separar exossomos de meios condicionados de células cultivadas

Os exossomos - vesículas de tamanho nanométrico ligadas à membrana que carregam biomoléculas funcionais - são ativamente secretados pela maioria dos tipos de células e podem ser isolados de sobrenadantes de cultura de células in vitro. Para isolar exossomos, primeiro colha o sobrenadante ou meio condicionado de uma cultura de células de interesse. O meio condicionado conteria exossomos, proteínas, detritos celulares e vesículas.

Centrifugue o meio para pellet os detritos celulares. Colete o sobrenadante contendo exossomos e filtre-o através de filtros celulares para remover as vesículas maiores. Transfira um volume específico do meio filtrado para um novo tubo. Em seguida, misture concentrações apropriadas de sacarose e óxido de deutério para preparar uma almofada de sacarose - um gradiente descontínuo de sacarose.

Adicionar um volume específico da solução de almofada de sacarose ao tubo que contém o meio; a solução forma uma camada separada na parte inferior. Agora, centrifugue o tubo em alta velocidade. A almofada de sacarose facilita a migração de exossomos do meio para a solução de sacarose, mantendo a integridade do exossomo. Os contaminantes proteicos de alta densidade ocupam